La superficie ocular está expuesta continuamente a diversos factores ambientales, y la inmunidad innata y adaptativa desempeñan papeles cruciales en las enfermedades de la superficie ocular (OSD). Previamente, hemos informado que la aplicación tópica de RCI001 confiere excelentes efectos antiinflamatorios y antioxidantes en modelos de ojo seco y quemadura química ocular. En este estudio, examinamos los efectos inhibitorios de RCI001 sobre las inflammasomas de Rac1 y NLRP3 in vitro e in vivo. Tras la aplicación de RCI001 a células RAW264.7 y Swiss 3T3, medimos la actividad de Rac1 utilizando un ensayo de precipitación con glutatión-S-transferasa (GST) y un kit de ensayo de activación de proteínas G. Además, cuantificamos la expresión de citoquinas inflamatorias (interleucina [IL]-1b, IL-6 y factor de necrosis tumoral [TNF]-a) en células RAW264.7 estimuladas con lipopolisacárido (LPS) mediante ELISA y PCR en tiempo real. En el modelo de quemadura alcalina ocular en ratón, RCI001 se administró mediante colirios (10 mg/mL, dos veces al día) durante 5 días, y se utilizó la suspensión oftálmica de acetato de prednisolona al 1 % (PDE) como control positivo. Se realizaron exámenes de la integridad del epitelio corneal (días 0-5) y estudios histológicos, y se cuantificaron los niveles de transcripción y proteína de Rac1, NLRP3, caspasa-1 e IL-1b mediante PCR en tiempo real y western blotting en tejidos corneales recogidos en los días 3 y 5. Observamos que RCI001 inhibió de forma dependiente de la dosis la actividad de Rac1 y diversas citoquinas inflamatorias en macrófagos murinos estimulados con LPS. Además, RCI001 restauró la integridad del epitelio corneal más rápidamente que el tratamiento con corticosteroides en córneas dañadas químicamente. En comparación con el grupo de solución salina, la activación de Rac1 y el eje inflammasoma NLRP3/IL-1b se suprimió en el grupo de RCI001, especialmente durante la fase temprana del modelo de quemadura alcalina ocular. RCI001 tópico suprimió la expresión de Rac1 activado y citoquinas inflamatorias in vitro y restauró rápidamente la córnea dañada al inhibir la activación de Rac1 y el eje inflammasoma NLRP/IL-1b in vivo. En consecuencia, RCI001 podría ser un agente terapéutico prometedor para el tratamiento de las OSD.
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2022.850287/abstract