眼表面は継続的に様々な環境要因に曝露されており、先天性免疫および適応免疫は眼表面疾患（OSD）において重要な役割を果たしています。以前、我々はRCI001の局所投与が乾性眼疾患および眼化学熱傷モデルにおいて優れた抗炎症作用および抗酸化作用を示すことを報告しました。本研究では、in vitroおよびin vivoにおいて、RCI001がRac1およびNLRP3インフラマソームに及ぼす阻害作用を評価しました。RAW264.7細胞およびSwiss 3T3細胞にRCI001を投与した後、グルタチオンS-トランスフェラーゼ（GST）プルダウンアッセイおよびGタンパク質活性化アッセイキットを用いてRac1の活性を測定しました。さらに、リポ多糖（LPS）刺激を受けたRAW264.7細胞において、ELISAおよびリアルタイムPCRを用いて炎症性サイトカイン（インターロイキン[IL]-1β、IL-6、および腫瘍壊死因子[TNF]-α）の発現を定量しました。マウス眼アルカリ熱傷モデルでは、RCI001を点眼（10 mg/mL、1日2回）として5日間投与し、1%プレドニゾロンアセテート（PDE）点眼懸濁液を陽性対照として使用しました。角膜上皮の完全性（0〜5日目）および組織学的検査を行い、3日目および5日目に採取した角膜組織において、リアルタイムPCRおよびウェスタンブロッティングを用いてRac1、NLRP3、caspase-1、およびIL-1βの転写産物およびタンパク質レベルを定量しました。LPS刺激を受けたマウスマクロファージにおいて、RCI001が用量依存的にRac1の活性および様々な炎症性サイトカインを阻害することが観察されました。さらに、化学的に損傷した角膜において、RCI001はコルチコステロイド治療よりも速やかに角膜上皮の完全性を回復させました。生理食塩水群と比較して、RCI001群ではRac1およびNLRP3インフラマソーム/IL-1β軸の活性化が抑制されており、特に眼アルカリ熱傷モデルの早期段階において顕著でした。局所投与されたRCI001は、in vitroにおいて活性化されたRac1および炎症性サイトカインの発現を抑制し、in vivoにおいてRac1およびNLRPインフラマソーム/IL-1β軸の活性化を阻害することで、損傷した角膜を速やかに回復させました。したがって、RCI001はOSDの治療において有望な治療薬となり得ます。
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2022.850287/abstract